尊龙凯时提供的SV40转染人成骨细胞HFOB119培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：第一次建议1:2传代，通常在2天后换液。
备注：请用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如果对比效果不理想，建议直接使用尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，待其状态良好时，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的理想方法。收到细胞后请用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，接着放入超净台内，严格遵循无菌操作。将细胞瓶放入35℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要售后依据，若未提供照片则默认为收到状态良好。传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入35℃、5% CO2的培养箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于35℃培养箱中消化1-2分钟，随后在显微镜下观察消化情况，若细胞大部分变圆且脱落，快速返回操作台，轻敲培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液后加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入35℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置查看，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使之脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上，再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入35℃水浴中解冻，直至冻存管无结晶后，使用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于35℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

注意：部分细胞贴壁不牢，在运输过程中可能发生细胞脱落，此为正常现象。如脱离细胞较多，可按以下方法处理：将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养（后期进行对比培养），沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬，最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入35℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

尊龙凯时对细胞出现问题的重发政策如下：

1. 若细胞在运输途中出现丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，提供证据后可重发。
2. 如细胞出现污染问题，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，核实后可重发。
3. 对于常温发货的细胞，请在静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时未存活（需附真实清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 在运输情况下未开封的细胞出现污染，可重发。
5. 细胞活性问题需在收到之日起7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定活力并核实后可重发。
6. 请在收到细胞当天以及第2、3天拍照以便售后跟进，如未告知，则视为产品合格。
7. 如出现问题，需要提供收到细胞前三天和出现问题时的照片，以及操作详细步骤，并与技术人员沟通，由技术人员进行责任判定。

尊龙凯时始终致力于为用户提供优质的细胞培养经验和售后服务，确保所有用户的需求得到满足。